Introducción a los medios de cultivo celular clásicos, ¿cómo elegir los medios?

Muchos tipos de medios de cultivo celular clásicos, como DMEM, RPMI 1640, MEM y DMEM/F12, son los más utilizados. Otros, como el medio M199, IMDM y L15, también se utilizan para cultivar ciertas células. Las características y aplicaciones de estos medios de cultivo celular son las siguientes.

1. Medio de cultivo celular BME

El medio Basic Eagle fue diseñado por Eagle en 1955 y contiene BSS + 12 tipos de aminoácidos + glutamina + 8 tipos de vitaminas. Es simple, fácil de agregar y adecuado para varias líneas celulares pasadas y uso especial en investigación, según el cual las variedades mejoradas de medios de cultivo celular son MEM, DMEM, IMDM, etc.

2. Medio de cultivo de células MEM

Esto se mejoró en el medio básico de Eagle (BME) en 1959, se eliminaron la lisina y la biotina y se incrementó la concentración de aminoácidos. Sin embargo, debido a su limitado contenido de nutrientes, no es necesariamente el mejor medio para el cultivo celular específico de producción.

3. Medio de cultivo celular DMEM

DMEM es un medio Eagle modificado por Dulbecco, inicialmente diseñado para fibroblastos de ratón. DMEM tiene el doble de concentración de aminoácidos que MEM, cuatro veces la concentración de vitaminas de MEM y utiliza el doble de concentración de HCO3 y CO2 para una mejor amortiguación. La formulación original contenía 1000 mg/L de glucosa, que luego se ajustó a 4500 mg/L para el crecimiento de ciertas células, a menudo denominado glucosa baja y alta.

El nivel bajo de azúcar es adecuado para el cultivo de células adherentes dependientes, especialmente para el cultivo de células tumorales con una tasa de crecimiento rápida y una adhesión deficiente. El alto contenido de azúcar es más adecuado para el cultivo de células en suspensión de alta densidad, para el cultivo clonal con poca adherencia pero que no quiere que se desprenda del punto de crecimiento original, y para el cultivo de células de mieloma y células transformadas transfectadas con ADN en hibridoma.

4. Medio de cultivo celular IMDM

Guilber e Iscove modificaron el medio de Dulbecco al medio de Iscove para cultivar eritrocitos y precursores de macrófagos. El medio de cultivo celular IMDM contiene selenio, aminoácidos y vitaminas adicionales, piruvato de sodio y HEPES y reemplaza el nitrato de hierro con nitrato de potasio. IMDM también promueve el crecimiento de linfocitos B de ratón, células B estimuladas por LPS, células hematopoyéticas de médula ósea, células T, y células de linfoma. IMDM es un medio de cultivo muy rico en nutrientes y se puede utilizar para la rápida proliferación de células de alta densidad.

5. Medio de cultivo celular RPMI-1640

Desarrollado por Moore et al. en Roswell Park Memorial Institute en 1967, está diseñado para el cultivo de linfocitos y contiene BSS + 21 tipos de aminoácidos + 11 tipos de vitaminas. Ahora también se utiliza para el cultivo de células en suspensión, como células hematopoyéticas especiales de mamíferos, leucocitos de proliferación normal o maligna y células de hibridoma. Se pueden usar como referencia otros linfocitos adultos como K-562, HL-60, Jurkat, Daudi, IM-9, células de linfoma de células T y células epiteliales HCT-15.

6. Medio de cultivo de células HamF10

1963 El diseño del jamón, que contiene oligoelementos, se puede utilizar cuando el contenido de suero es bajo, adecuado para el cultivo clonado. f10 es adecuado para células diploides humanas y de hámster, especialmente adecuado para el cultivo de células de líquido amniótico.

7. Medio de cultivo celular DMEM/F12

Ham's F12 está diseñado para clonar células CHO a baja concentración de suero y ahora se usa ampliamente en el análisis de la tasa de formación de clones y el cultivo primario. F12 también se puede utilizar con DMEM y otros volúmenes para obtener una alta concentración y composición de diversos productos. Este medio se ha aplicado a muchos cultivos primarios, y es más difícil plantear el cultivo de líneas celulares. También se usa a menudo como medio base para cultivos sin suero debido a su rico contenido de nutrientes y la capacidad de usar menos suero.

8. Medio de cultivo celular M199

El medio M-199 es un medio de cultivo celular con una composición química definida diseñado por Morgan et al. en 1950. Contiene 53 componentes además de BSS y es un medio integral utilizado principalmente para el cultivo de fibroblastos de embrión de pollo. El medio m-199 debe complementarse con el suero para apoyar el cultivo a largo plazo. Puede usarse para cultivar células de muchas especies de origen y puede cultivar células transfectadas, y ahora se usa ampliamente para virología y producción de vacunas.

9. Medio McCoy5A

El medio McCoy5A es un medio de cultivo celular diseñado por MeCoy en 1959 para células de sarcoma y contiene BSS y otros 40 componentes. Puede apoyar el crecimiento de varios injertos primarios (como médula ósea, piel, pulmón y bazo) y se utiliza principalmente para el cultivo de biopsias de tejidos, algunos cultivos de linfocitos y apoyo al crecimiento de algunas células difíciles de cultivar, además de primarios generales. cultivo celular, por ejemplo, fibroblastos de sarcoma de rata de Jensen, linfocitos humanos, HT-29, BHL-100 y otras células epiteliales.

10. Medio de cultivo celular L15

El medio de cultivo L-15 es adecuado para el cultivo de células tumorales de proliferación rápida y se utiliza para cultivar líneas de células tumorales en ausencia de CO2. Este medio de cultivo utiliza un sistema tampón de fosfato con una composición de aminoácidos mejorada y glucosa reemplazada por galactosa.

¿Cómo elegir un medio de cultivo celular?

1. Puede consultar la literatura de referencia o consultarla cuando compre líneas celulares. También puede buscar en los sitios web de algunas compañías biológicas, como el sitio web de Invitrogen, que tiene una herramienta de base de datos de líneas celulares. Seleccione el tipo de célula que le interesa y aparecerán los medios, sueros y reactivos de transfección recomendados, etc., a veces con pasos de transfección optimizados, lo cual es muy conveniente.
2. También puede consultar los medios habituales que se utilizan en otros laboratorios, muchos de los cuales son adecuados para el cultivo de varias células.
3. Elija el medio según las características de la línea celular y las necesidades del experimento. Por ejemplo, las líneas celulares de ratón se seleccionan en su mayoría RPMI1640.
4. Utilice varios medios para cultivar las células objetivo y observe su estado de crecimiento. Puede usar la curva de crecimiento, la tasa de formación de colonias y otros indicadores para juzgar, de acuerdo con los resultados experimentales, para seleccionar el mejor medio, que es el método más objetivo pero más tedioso.