Preguntas frecuentes sobre medios de cultivo celular

Preguntas frecuentes (FAQ) sobre el medio de cultivo celular

I. Selección del medio de cultivo celular

1. ¿Cómo elegir un medio adecuado para mis células?

• Referencia primaria: El medio utilizado para establecer la línea celular específica suele ser la primera opción. Consulte la literatura pertinente o a su proveedor de células.
• Según el tipo de célula y el experimento:
  • Las líneas celulares de ratón a menudo se cultivan en RPMI1640.
  • Para hibridación celular, experimentos de transferencia genética, IMDM puede ser elegido.
• Método empírico (recomendado): Cultive células en múltiples tipos de medios y compare resultados utilizando indicadores como curvas de crecimiento y eficiencia de siembra para seleccionar el medio óptimo.
• Consultar bases de datos autorizadas: Las ATCC (Colección Americana de Cultivos Tipo) El sitio web proporciona información detallada sobre el cultivo de la mayoría de las líneas celulares, incluidos los medios recomendados, las condiciones y la literatura relacionada.

II. Almacenamiento y vida útil

2. ¿Se puede almacenar un medio líquido a -20°C?

• No. El almacenamiento a -20 °C puede provocar la precipitación de las sales del medio. Al descongelarse, estas sales podrían no disolverse completamente, lo que provoca una disminución de la osmolaridad. Esto puede provocar la ruptura y muerte de las células.

3. ¿Cuánto tiempo se puede conservar el medio líquido recién preparado?

• Se recomienda almacenar el medio recién preparado a 4°C protegido de la luz y úsalo plazo de una semanaCuanto más fresco sea el medio, mejor.

4. ¿Puede conservarse durante largo tiempo un medio suplementado con suero y antibióticos?

• No. Una vez que se agregan el suero y los antibióticos al medio fresco, debe usarse dentro de dos o tres semanasAlgunos antibióticos y componentes esenciales del suero comienzan a degradarse después de la descongelación.

5. ¿Por qué el medio almacenado en el refrigerador se vuelve rojo oscuro (alcalino)?

• Cuando se almacena a 4°C, El CO₂ se escapa gradualmente del medio, lo que provoca un aumento del pH (se vuelve más alcalino). El indicador de pH Fenol rojo se vuelve de un color rojo púrpura más oscuro en condiciones alcalinas.
• La Solución: El pH se puede ajustar burbujeando. CO₂ esterilizado por filtración a través del medio antes de su uso.

III. Componentes y aditivos

6. ¿Es necesario añadir antibióticos al medio?

• Generalmente no recomendado. No se deben agregar antibióticos a los cultivos de rutina para evitar enmascarar contaminaciones sutiles o ejercer efectos citotóxicos sobre las células.
• excepción: Para evitar la contaminación bacteriana/fúngica, Penicilina-estreptomicina (Pen-Strep) Se puede añadir. Las concentraciones finales habituales son 100 U/mL de penicilina y 100 µg/mL de estreptomicina.

7. ¿Se debe ajustar la concentración de antibiótico para el cultivo sin suero?

• Sí, reduce la cantidad. La concentración de antibióticos debe reducirse al menos el 50% En comparación con la concentración utilizada en medios con suero, las proteínas séricas se unen e inactivan algunos antibióticos; esta inactivación no ocurre en condiciones sin suero.

8. ¿Por qué algunos experimentos requieren un medio libre de rojo fenol?

• Dos razones principales:
  1. Efectos hormonales: El rojo fenol puede imitar los efectos de las hormonas esteroides (particularmente el estrógeno), interfiriendo con los experimentos que utilizan células sensibles a las hormonas.
  2. Interferencia con la detección: Las propiedades de fluorescencia del rojo fenol pueden interferir con métodos de detección como la citometría de flujo.

9. ¿Cuáles son las funciones de los componentes del medio común?

• NaHCO₃ (bicarbonato de sodio): Forma un sistema de amortiguación con CO₂ para mantener el pH estable en la incubadora.
• Piruvato de sodio: Sirve como fuente alternativa de carbono para las células (cuando la glucosa es baja). La concentración final común es 1 mM.
• HEPES: Un potente tampón químico que proporciona una estabilización adicional del pH, especialmente fuera del entorno de la incubadora de CO₂. La concentración final habitual es 25 mM.
• Rojo fenol: Actúa como indicador de pH (Rojo = Neutro ~7.4, Amarillo = Ácido, Violeta = Alcalino).
• L-Glutamina: Un aminoácido esencial para las células, que participa en el metabolismo energético y la síntesis de proteínas. inestable en solución y debe almacenarse congelado a -20 ° CGeneralmente se añade al medio justo antes de su uso. La concentración final habitual es 2 mMEl medio suplementado con glutamina debe volver a suplementarse si se almacena a 4 °C durante más de 2 semanas.

IV. Influencia del pH

10. ¿Cómo afecta el pH del medio al crecimiento celular?

• El pH óptimo para la mayoría de las células es 7.2 – 7.4 Las desviaciones de este rango pueden ser perjudiciales.
• Las células generalmente toleran Acidez suave mejor que alcalinidad suave.
• Nota:  El pH del líquido a menudo aumenta ~ 0.2 unidades después de la filtración a través de un filtro de 0.1 µm o 0.2 µm.

11. ¿Por qué nuestro medio RPMI 1640 se ve amarillo? ¿El pH es incorrecto?

• Esto es normal. Debido a su formulación, RPMI 1640 es una variante baja en rojo fenol; contiene solo un cuarto La cantidad de rojo fenol presente en el DMEM. El color más claro y amarillento se debe a esta menor concentración, no a un pH bajo incorrecto.