Medio de cultivo MEM (medio esencial mínimo)

El Medio de Cultivo MEM (Medio Esencial Mínimo) también se denomina Medio Esencial Mínimo, Medio Básico Mínimo o Medio Eagle limitado bajo. Ha sido desarrollado por Harry Eagle sobre la base de Eagle basic Medium (BEM). Es uno de los Medium más básicos y aplicables con la gama más amplia. Es uno de los medios más utilizados en el cultivo de células animales, incluidos HeLa, BHK-21, 293, HEP-2, HT-1080, McF-7, fibroblastos y astrocitos primarios de rata. El medio de cultivo MEM contiene solo 12 aminoácidos esenciales, glutamina y 8 vitaminas. Es de composición simple y se utiliza principalmente para el cultivo de células adherentes. Después de la modificación de la fórmula, también se puede utilizar para el cultivo de otros tipos de células.

Ingredientes del medio de cultivo MEM

L-glutamina (Glutamina)

La L-glutamina (Glutamina) es un elemento nutritivo esencial en el cultivo celular, pero es inestable en solución y se degradará espontáneamente. La cantidad de L-glutamina se puede ajustar arbitrariamente según las necesidades de investigación del medio sin L-glutamina, y la adición de L-glutamina fresca o sus sustitutos en el momento del uso es más beneficiosa para el crecimiento celular.

L-alanil-L-glutamina (Ala-Glu), también conocida como alanil-glutamina y alanil-glutamil dipéptido, es un aditivo de cultivo celular avanzado que puede reemplazar directamente a la L-glutamina en el medio de cultivo celular. La l-glutamina es un nutriente esencial en el cultivo celular, pero es inestable en solución y, sin embargo, es inestable en solución y se degrada espontáneamente para producir amoníaco y ácido piroglutámico, de los cuales el amoníaco es dañino para las células, mientras que la L-alanil- La L-glutamina es muy estable en solución acuosa y no se degrada espontáneamente. El mecanismo de utilización celular es que durante el cultivo celular, las células liberarán gradualmente una peptidasa en el medio de cultivo para hidrolizar L-alanil-L-glutamil en L-alanina y L-glutamina, y luego las células absorberán y utilizarán estas dos hidrólisis. productos El proceso de utilización celular de L-alanil-L-glutamil es similar a la estrategia de cultivo de adición de flujo, en el sentido de que se agregan continuamente niveles bajos de L-glutamina al medio de cultivo, lo que aumenta la utilización de L-glutamina sin generar un exceso. amoníaco, que es más propicio para el crecimiento celular. L-alanil-L-glutamil puede reemplazar la L-glutamina equimolar, es adecuado para todas las células, requiere poca adaptación y puede extender el tiempo de cultivo celular. También puede extender el tiempo de cultivo celular y reducir el número de pases, lo que ahorra tiempo y dinero. Las células cultivadas en medio suplementado con L-glutamina mostraron una reducción más lenta de la actividad que las cultivadas en un medio suplementado con L-glutamina. El período de retraso ligeramente más largo se debe al tiempo requerido para la liberación de peptidasa y la digestión del dipéptido.

NEAA (aminoácidos no esenciales)

Los NEAA (aminoácidos no esenciales), que son 7 NEAA de L-alanina, ácido L-glutámico, L-asparagina, ácido L-aspártico, L-prolina, L-serina y glicina agregados al medio MEM, pueden reducir el lado efectos de la propia producción de células de aminoácidos no esenciales durante el cultivo celular y promover eficazmente la proliferación celular y el metabolismo.

La glucosa se puede ajustar a voluntad según las necesidades de la investigación, lo cual es conveniente y rápido. El medio de tipo alto en azúcar se usa comúnmente para células de crecimiento rápido con baja adhesión, células de mieloma de hibridoma, células clonales, células transformadas de transfección de ADN, varias células huésped de virus primarios, cultivo de células individuales y producción de vacunas, como el uso de Células CHO para expresar EPO y producción de vacuna contra la hepatitis B. El medio bajo en azúcar es más adecuado para el cultivo de células adherentes dependientes de metabolismo más lento.

HEPES es un excelente tampón biológico, que no tiene ningún efecto tóxico sobre las células. El medio con HEPES puede mantener un rango de pH constante durante un período de tiempo más prolongado, lo que puede evitar que el crecimiento celular se vea afectado negativamente por las grandes fluctuaciones de pH del medio de cultivo. Se puede utilizar en incubadoras sin CO2.

El rojo de fenol se usa como indicador de PH en el medio de cultivo para monitorear continuamente el pH del medio de cultivo. El rojo fenol hace que el medio de cultivo sea amarillo con un PH bajo, morado con un PH más alto y rojo con un PH de 7.2 a 7.4, que es el más adecuado para el cultivo celular. Sin embargo, el rojo de fenol también tiene algunas desventajas. Los estudios han demostrado que el rojo de fenol puede imitar los efectos de las hormonas esteroides (especialmente el estrógeno), por lo que cuando se usan células sensibles al estrógeno (como el tejido mamario), es mejor usar un medio sin rojo de fenol. El rojo de fenol puede interferir con la detección durante el análisis de citometría de flujo. Además, la presencia de rojo fenol en algunas formulaciones de medios sin suero puede interferir con el equilibrio sodio-potasio.

Solución de penicilina-estreptomicina

La solución de penicilina-estreptomicina, también conocida comúnmente como “antibiótico dual”, es el antibiótico más utilizado en cultivos in vitro para prevenir la contaminación microbiana, en el que la penicilina interfiere con la síntesis de la pared celular bacteriana y es particularmente eficaz contra las bacterias Gram-positivas, mientras que La estreptomicina inhibe la síntesis de proteínas bacterianas al unirse a la subunidad 30S del ribosoma bacteriano y es particularmente eficaz contra las bacterias. pero es particularmente efectivo contra bacterias Gram-negativas. La combinación de penicilina y estreptomicina puede prevenir la mayor parte de la contaminación bacteriana.

Este producto contiene aminoácidos, vitaminas, sales inorgánicas y muchos otros componentes necesarios para el cultivo múltiple de células, pero no contiene proteínas, lípidos ni ningún factor de crecimiento, por lo que el producto debe usarse con suero o aditivos sin suero.

Precauciones a considerar

Este producto ha sido filtrado y desbacterizado y debe usarse con cuidado para una operación aséptica para evitar la contaminación.
No congelar-descongelar el producto para mantener el mejor uso del producto.
Este producto está destinado únicamente a la investigación científica o al uso de estudios adicionales, no para el diagnóstico o el tratamiento.