Proceso de extracción de ácido nucleico.

La extracción de ácido nucleico es un paso fundamental en la biología molecular y las pruebas de diagnóstico, que permite a los investigadores y profesionales de la salud aislar ADN o ARN de diversas muestras biológicas para su análisis posterior. A continuación se ofrece una descripción general del proceso de extracción de ácidos nucleicos:

Coleccion de muestra: El proceso comienza con la recolección de muestras biológicas que contienen los ácidos nucleicos diana. Las muestras pueden incluir sangre, tejido, saliva, hisopos, orina u otros fluidos corporales, según la aplicación específica.

Lisis de muestra: Las muestras recolectadas se lisan para abrir las células y liberar los ácidos nucleicos. Los tampones de lisis que contienen detergentes, agentes caotrópicos o enzimas se utilizan normalmente para alterar las membranas celulares y degradar proteínas, permitiendo el acceso a los ácidos nucleicos.

Unión de ácidos nucleicos: Una vez que los ácidos nucleicos se liberan en el lisado, deben unirse selectivamente a una matriz en fase sólida, como membranas de sílice o perlas magnéticas. La elección de la matriz de unión depende de factores como el tipo de muestra, el tipo de ácido nucleico (ADN o ARN) y las aplicaciones posteriores.

Lavado: Después de la unión, la matriz en fase sólida se lava para eliminar contaminantes como proteínas, lípidos y otros desechos celulares. Los pasos de lavado ayudan a purificar los ácidos nucleicos y reducir el ruido de fondo en análisis posteriores.

Elución: Los ácidos nucleicos purificados luego se eluyen de la matriz en fase sólida utilizando un tampón bajo en sal o agua. La elución libera los ácidos nucleicos en una solución limpia, lista para aplicaciones posteriores como PCR (reacción en cadena de la polimerasa), secuenciación u otros ensayos moleculares.

Control de calidad: Los ácidos nucleicos extraídos pueden someterse a pasos de control de calidad para evaluar su concentración, pureza e integridad. Los métodos comunes de cuantificación incluyen espectroscopia UV (por ejemplo, usando un espectrofotómetro) o fluorometría (por ejemplo, usando un ensayo basado en fluorescencia). La pureza a menudo se evalúa midiendo la relación de absorbancia en longitudes de onda específicas (por ejemplo, relación A260/A280 para ADN o relación A260/A230 para ARN). La integridad se puede evaluar mediante electroforesis en gel o electroforesis capilar.

Almacenamiento: Los ácidos nucleicos purificados se pueden almacenar a temperaturas adecuadas (-20 °C o -80 °C) para almacenamiento a corto o largo plazo, según el uso previsto y los requisitos de estabilidad.

Es importante tener en cuenta que los protocolos de extracción de ácidos nucleicos pueden variar según el tipo de muestra específica, el tipo de ácido nucleico deseado, las aplicaciones posteriores y los equipos o kits disponibles. Los investigadores y el personal de laboratorio a menudo optimizan los protocolos de extracción para lograr altos rendimientos, pureza e integridad de los ácidos nucleicos extraídos para un análisis posterior confiable. Además, la automatización y los enfoques basados ​​en kits se han vuelto cada vez más comunes para agilizar y estandarizar el proceso de extracción, especialmente en entornos de laboratorio de alto rendimiento.

Proceso de extracción de ácido nucleico del virus de la influenza.

El proceso de extracción de ácido nucleico para el virus de la influenza suele seguir un flujo de trabajo similar al de la extracción de ácido nucleico general, con algunas consideraciones específicas para el virus y las muestras que se procesan. A continuación se ofrece una descripción general del proceso de extracción de ácido nucleico para el virus de la influenza:

Recolección de muestras: comúnmente se recolectan hisopos nasofaríngeos, lavados nasales, hisopos de garganta o secreciones respiratorias de personas sospechosas de tener infección por influenza.

Inactivación de muestras: para garantizar la bioseguridad y prevenir la transmisión viral, las muestras recolectadas pueden tratarse con un tampón de inactivación viral apropiado o un tratamiento térmico para que el virus no sea infeccioso y al mismo tiempo se preserven los ácidos nucleicos para la extracción.

Lisis de la muestra: las muestras inactivadas se lisan para liberar ARN viral. Los tampones de lisis que contienen detergentes, agentes caotrópicos o enzimas se utilizan para alterar las envolturas virales y liberar ácidos nucleicos virales.

Unión de ácidos nucleicos: después de la lisis, el ARN viral se une selectivamente a una matriz en fase sólida, como membranas de sílice o perlas magnéticas, mediante un proceso que normalmente involucra sales caotrópicas y etanol. Este paso permite la purificación y concentración del ARN viral.

Lavado: la matriz en fase sólida que contiene el ARN viral unido se lava para eliminar contaminantes como proteínas, desechos celulares e inhibidores que pueden interferir con las aplicaciones posteriores.

Elución: el ARN viral purificado se eluye de la matriz en fase sólida utilizando un tampón bajo en sal o agua. La elución libera el ARN viral en una solución limpia, lista para análisis posteriores, como la reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR) para la detección y caracterización del virus de la influenza.

Control de calidad: el ARN viral extraído puede someterse a pasos de control de calidad para evaluar su concentración, pureza e integridad mediante métodos como espectroscopia UV, fluorometría o RT-PCR.

Almacenamiento: El ARN viral purificado se puede almacenar a temperaturas adecuadas (-20 °C o -80 °C) para almacenamiento a corto o largo plazo, según el uso previsto y los requisitos de estabilidad.

Es importante tener en cuenta que el proceso de extracción de ácido nucleico para el virus de la influenza puede variar según factores como el tipo de muestra específica, la carga viral, el método de detección utilizado y los equipos o kits disponibles. Además, se deben seguir estrictamente las precauciones de bioseguridad para prevenir la transmisión viral durante el procesamiento de muestras. Las plataformas de extracción automatizadas y los kits de extracción comerciales diseñados específicamente para la detección del virus de la influenza se utilizan comúnmente para agilizar y estandarizar el proceso de extracción en laboratorios clínicos y de investigación.