Medio de cultivo DMEM en polvo

DMEM se desarrolla sobre la base del medio MEM. En comparación con el medio MEM, el contenido de aminoácidos aumentó 2 veces y el contenido de vitaminas aumentó 4 veces. Al mismo tiempo, se han añadido aminoácidos no esenciales, iones de hierro traza y piruvato de sodio. El medio DMEM se diseñó inicialmente con un contenido de glucosa de 1000 mg/L (tipo bajo en azúcar), y luego se desarrolló un contenido de glucosa de 4500 mg/L (tipo alto en azúcar), que ha sido ampliamente utilizado en el cultivo de varias células. El medio de cultivo alto en glucosa se usa ampliamente en células de crecimiento rápido con baja adhesión, células de mieloma de hibridoma, células clonadas, células transformadas transfectadas con ADN, células huésped de varios virus primarios, cultivo de células individuales y producción de vacunas, como la expresión de células CHO de EPO y producción de vacunas contra la hepatitis B. El medio bajo en glucosa es más adecuado para el cultivo de células de adherencia dependientes de metabolismo más lento. El medio sin glucosa puede ajustar la concentración de glucosa a voluntad según las necesidades de la investigación, lo cual es conveniente y rápido. DMEM no contiene proteínas, lípidos ni factores de crecimiento. Por lo tanto, DMEM debe complementarse con nutrientes, generalmente con suero fetal bovino (FBS) al 10%. DMEM utiliza un sistema tampón de bicarbonato de sodio (3.7 g/l) y, por lo tanto, requiere un entorno con un 5-10 % de CO2 para mantener el pH fisiológico. Para una amplia gama de aplicaciones de cultivo celular, ofrecemos medios DMEM modificados con varios componentes, así como medios DMEM con componentes personalizables.

Ingredientes del medio de cultivo DMEM en polvo

Este medio de cultivo celular de polvo seco DMEM debe complementarse con bicarbonato de sodio, ajustar el pH y filtrar durante la preparación. La formulación detallada es la siguiente:

1. Agregue 950 ml de agua destilada a un recipiente de mezcla lo más cerca posible del volumen final.
2. Agregue medio seco en polvo a agua a temperatura ambiente (15°C a 30°C) y revuelva suavemente. No caliente el agua.
3. Enjuague el interior del paquete para eliminar cualquier resto de polvo.
4. Agregue 50 mL de solución de NaHCO75 de 3 g/L al medio de cultivo.
5. Ajuste el pH de 0.2 a 0.3 unidades por debajo del pH de trabajo final deseado agregando y agitando lentamente NaOH 1 N o HCl 1 N. El pH puede aumentar de 0.1 a 0.3 unidades después de la filtración. El pH de trabajo recomendado es 7.0-7.4.
6. Use agua destilada para ajustar el volumen final.
7. Inmediatamente procese el medio de cultivo a través de una membrana de filtro de 0.2 µm en recipientes estériles utilizando un sistema de filtración de presión positiva.