Cómo prevenir la contaminación por aerosoles en los laboratorios de PCR

La aplicación y el desarrollo de la tecnología PCR (reacción en cadena de la polimerasa) ha dado lugar a pruebas más eficaces para el diagnóstico de enfermedades, especialmente la promoción y aplicación de la PCR cuantitativa fluorescente, que ha mejorado considerablemente la sensibilidad y la precisión de la prueba. Sin embargo, con el uso generalizado de esta tecnología en los laboratorios de detección de patógenos, el problema de la contaminación por aerosoles en los laboratorios de PCR ha despertado una preocupación progresiva. Con el fin de evitar de manera efectiva la contaminación por aerosol de ADN / ARN del laboratorio de PCR, para obtener resultados de prueba estables y confiables, para evitar falsos positivos, el laboratorio de PCR debe establecer medidas estrictas contra la contaminación y el sistema de monitoreo de contaminación correspondiente para prevenir la contaminación por aerosol, una vez que se encuentra el aerosol. contaminación, para encontrar prontamente la causa y la correspondiente solución al problema de contaminación.

Zonificación de Laboratorios

El laboratorio de PCR debe dividirse en cuatro secciones de acuerdo con las reglamentaciones pertinentes: sección de preparación de reactivos, sección de preparación de muestras, sección de amplificación de PCR y sección de análisis de productos, siendo las dos primeras secciones la sección de preamplificación y las dos últimas secciones la sección de sección de post-amplificación. El área de preamplificación y el área de postamplificación deben estar estrictamente separadas y equipadas con ventilación y purificación para formar una diferencia de presión entre las secciones. El flujo de trabajo, incluidos los materiales experimentales, los reactivos, el papel de registro, los bolígrafos, los materiales de limpieza, etc., solo puede fluir desde la zona de preamplificación a la zona de postamplificación, es decir, desde la zona de preparación de reactivos → zona de procesamiento de muestras → zona de amplificación → producto zona de análisis, y no deberá fluir en la dirección inversa. Está estrictamente prohibido invertir el flujo en el corredor limpio mientras se forman diferentes diferencias de presión de gradiente entre cada sección, la sala intermedia correspondiente y el corredor limpio para que el flujo de aire sea el mismo que la dirección de trabajo.

Configuración de controles

Se preparan cada vez antes de realizar el experimento dos controles negativos (ambos con agua como plantilla, uno con la muestra involucrada en la extracción de ácido nucleico y el otro no involucrado en la extracción, agregados solo al configurar el sistema de amplificación) antes de realizar el experimento, con el fin de monitorear la contaminación por aerosoles en el laboratorio y determinar si existe contaminación y cuál es su causa, de modo que se puedan tomar medidas para prevenirla y eliminarla. También se debe establecer un control positivo para monitorear la confiabilidad y precisión de los resultados experimentales.

Monitoreo de Aerosoles de Laboratorio

El aire del laboratorio se purifica regularmente con un purificador de aire doméstico, y el filtro del purificador se sumerge en agua, se mezcla y el agua mezclada se usa como muestra para las pruebas correspondientes a fin de mantenerse al tanto de la contaminación de aerosoles en el aire. Recopile regularmente muestras de hisopos de algodón del interior y la superficie de pistolas de pipetas, extractores, amplificadores y otros instrumentos para realizar pruebas a fin de comprender la contaminación en los instrumentos experimentales.

Flujo de trabajo estricta

Cada sección de PCR está equipada con su propia ropa de trabajo, que se puede distinguir por colores, y la ropa de trabajo correspondiente debe cambiarse al ingresar a cada sección; mientras tanto, la entrada del corredor limpio está equipada con zapatos especiales para la sala de PCR, que deben cambiarse al ingresar, y se equipan tapetes de fieltro al frente de cada sección. El personal de laboratorio en el corredor limpio solo puede ir desde la dirección del área de preparación de reactivos hacia la dirección del área de análisis de resultados, y cada sección está equipada con personal diferente para la operación si las condiciones lo permiten, de manera de evitar que el personal de cada sección moviéndose unos alrededor de otros.

Mejore la limpieza y desinfección

Una buena limpieza y desinfección del laboratorio es una forma eficaz de prevenir la contaminación por aerosoles en el laboratorio. El alcance de la limpieza de laboratorios incluye la limpieza de superficies de trabajo (bancos de prueba, bancos ultralimpios y armarios de almacenamiento, etc.), superficies de instrumentos y equipos (cabezales giratorios de centrífugas, bloques calefactores para extracción de ADN, ranuras de muestra de amplificadores, pipetas varillas para pipeteo, ranuras de spiking de analizadores genéticos, etc.), herramientas o utensilios reutilizados, etc.

Antes y después del inicio del experimento, las superficies de las áreas e instrumentos mencionados anteriormente se limpian repetidamente con una solución de hipoclorito de sodio al 10 % recién preparada y luego se lavan con etanol al 75 % para eliminar los residuos, y el experimento solo se puede realizar después el alcohol se ha evaporado. Esto puede eliminar eficazmente los diversos contaminantes adheridos a sus superficies. Al mismo tiempo, el laboratorio se desinfecta periódicamente mediante irradiación con luz ultravioleta.