Medio en polvo M199

M199 es especialmente adecuado para el cultivo de células no transformadas y también se usa comúnmente en virología, producción de vacunas y cultivo in vitro de explantes primarios de células epiteliales pancreáticas de rata y tejido de cristalino de ratón. En comparación con otros medios basales, M199 contiene componentes únicos, que incluyen adenina, adenosina, hipoxantina, timina y otras vitaminas. M199 tiene dos composiciones de sal balanceadas, la composición de sal de Earle se usa comúnmente en ambientes con CO2, la composición de sal de Hank se usa en ambientes sin CO2. El medio 199 no contiene proteínas, lípidos ni factores de crecimiento. El medio 199 utiliza un sistema tampón de bicarbonato de sodio (2.2 g/l) y, por lo tanto, requiere un entorno de 5 a 10 % de CO2 para mantener el pH fisiológico. Para una amplia gama de aplicaciones de cultivo celular, proporcionamos medios M199 modificados con varios componentes, así como medios M199 con componentes personalizables.

Ingredientes del Medio M199 en Polvo

Este medio de cultivo de células en polvo seco M199 debe complementarse con bicarbonato de sodio, ajustarse al pH y filtrarse durante la preparación. El esquema de preparación detallado es el siguiente:

1. Agregue 950 ml de agua destilada a un recipiente de mezcla lo más cerca posible del volumen final.
2. Agregue medio seco a agua a temperatura ambiente (15°C a 30°C) y revuelva suavemente. No caliente el agua.
3. Enjuague el interior del paquete para eliminar cualquier resto de polvo.
4. Agregar 29.3 mL de solución de NaHCO75 de 3 g/L al medio.
5. Ajuste el pH de 0.2 a 0.3 unidades por debajo del pH de trabajo final deseado agregando y agitando lentamente NaOH 1 N o HCl 1 N. El pH puede aumentar de 0.1 a 0.3 unidades después de la filtración. El pH de trabajo recomendado es 7.1-7.4.
6. Ajustar el volumen final con agua destilada.
7. Inmediatamente procese el medio a través de la función de filtración de membrana de un filtro de 0.2 μm en un recipiente estéril usando un sistema de presión positiva.