Reacción en cadena de la polimerasa, enzimas de PCR comunes

La PCR (reacción en cadena de la polimerasa) es una técnica comúnmente utilizada para amplificar moléculas de ADN in vitro, y las enzimas de la PCR son un componente clave de esta reacción. Los principales tipos de enzimas de PCR incluyen la polimerasa Taq, la polimerasa Pfu y las variantes de inicio en caliente de Taq. ADN polimerasa.

Polimerasa taq

La Taq polimerasa fue una de las primeras enzimas de PCR que se utilizó ampliamente. Fue aislado de una bacteria conocida como Thermus acuáticos y tiene una excelente resistencia al calor. La polimerasa Taq es estable a altas temperaturas y es adecuada para los pasos de desnaturalización, hibridación y extensión de la PCR. Sin embargo, la Taq polimerasa sufre una alta tasa de error en regiones con alto contenido de GC porque carece de la función de corrección de exonucleación 3′-5′.

Polimerasa Pfu

La polimerasa Pfu se aísla de cianobacterias termófilas y tiene una resistencia al calor superior en comparación con la polimerasa Taq. Tiene una función de corrección de exonucleótidos 3′-5′, por lo que tiene una menor tasa de error y genera productos de amplificación más precisos al amplificar regiones con alto contenido de GC.

Variantes de arranque en caliente de la ADN polimerasa Taq

Dado que la Taq polimerasa necesita activarse a temperaturas más altas, pueden producirse productos no específicos al comienzo de la reacción de PCR. Para superar este problema, se han introducido enzimas de PCR de arranque en caliente, incluida una variante inactiva a bajas temperaturas y activable a altas temperaturas. Esto ayuda a reducir la formación de productos no específicos en las primeras etapas de la reacción de PCR, mejorando así la especificidad.

Dado que la Taq polimerasa necesita activarse a temperaturas más altas, pueden generarse productos no específicos al comienzo de la reacción de PCR. Para superar este problema, se han introducido enzimas de PCR de arranque en caliente, incluida una variante inactiva a bajas temperaturas y activable a altas temperaturas. Esto ayuda a reducir la formación de productos no específicos en las primeras etapas de la reacción de PCR, mejorando así la especificidad.